Introduction

Ce ne sont pas tous les éléments qui sont éliminables. Par exemple, il n’y a aucun moyen pour se débarrasser des leucocytes très abondants. Dans ces conditions, le seul moyen est de diminuer la densité de l’élément obscurcissant soit en faisant une dilution d’une portion de culot ou en tentant d’amincir le liquide examiné en exerçant une pression sur la lamelle pour produire des plages moins denses qui permettraient de déceler la présence de d’autres éléments cliniquement significatifs. Ces deux opérations affectent la quantification des éléments. Il faut donc prendre soin de bien noter les valeurs originales.

Les opérations pour éliminer des envahissants modifient définitivement le culot. Il est donc préférable de travailler sur un aliquot, ce qui permet de revenir au spécimen primaire.

Matériels

• Acide acétique 2%
• NaOH 1%
• Solution de Hank’s
• Tampon PBS 131 mM NaCl, 1.79 mM KCl, 0.86 mM MgCl2, 11.80 mM Na2HPO4. 2H2O, 1.80 mM Na2HPO4.H2O) of pH 7.4
• Solution hémolysante o Ex1 : 150 mM NH4Cl, 10 mM KHCO3, 0.1 mM Na2EDTA, pH 7.4 (Lysing Beckman Coulter)

Élimination des urates

Les urates sont normalement le résultat de la réfrigération du spécimen. Le moyen le plus simple est de placer le spécimen complet à 37-40°C pour une quinzaine de minutes. Une fois concentré dans le culot, le volume résiduel sera probablement incapable de dissoudre la quantité d’urate. Les urates sont des cristaux amorphes qui sont insolubles entre 5,5 et 7,0 de pH. En bas de 5,5, les urates se transforment en acide urique. Cette particularité peut être utilisée pour clarifier le culot, mais le succès est relatif

Technique:

• Prendre 3 gouttes de culot et ajouter une goutte d’acide acétique 2%
• Examiner au microscope

Une autre procédure profite du fait que les urates sont beaucoup plus solubles en milieu alcalin. Il faut utiliser une solution alcaline pour augmenter le pH mais cette procédure en réglant le problème d’urate provoque souvent un problème équivalent de phosphates amorphes. Il faut éviter l’ammoniaque, car celle-ci provoque la formation de triples phosphates.

Technique:

• Prendre 3 gouttes de culot et ajouter une goutte de NaOH 1% ( la quantité à ajouter dépend de la quantité d’urate)
• Examiner au microscope

Élimination de l’acide urique

L’élimination de l’acide urique peut être rendue nécessaire parce que parmi les cristaux certains ont une taille qui empêche le dépôt normal de la lamelle.

Technique:

• Prendre 3 gouttes de culot et ajouter une goutte de solution de Hank’s
• Examiner au microscope

Si le pouvoir tampon de la solution est incapable de neutraliser la quantité d’acide urique, le NaOH 1% devient une option.

Élimination des phosphates amorphes et des triples phosphates

Ces cristaux se retrouvent en milieu alcalin. Les phosphates amorphes sont le résultat du pH alcalin de l’urine tandis que les triples phosphates (struvite) sont le résultat de l’alcalisation de l’urine par ou en présence d’ammoniac. Cet ammoniac est généralement le résultat de la conversion bactérienne de l’urée.

Technique:

• Prendre 3 gouttes de culot et ajouter une goutte d’acide acétique 2%
• Examiner au microscope

Élimination des érythrocytes

Il est possible d’éliminer, dans certaines conditions, les érythrocytes qui cachent les éléments autres du sédiment. La méthode est basée sur l’hémolyse des hématies ce qui libère une partie du volume occupé par celles-ci. Il y a plusieurs méthodes pour hémolyser spécifiquement les érythrocytes. La méthode classique utilise l'acide acétique 2%, nous présentons ici une méthode plus douce.

Technique:

• Prendre 3 gouttes de culot et ajouter 20uL de réactif hémolysant. Le « Lysing reagent Beckman Coulter » donne de bons résultats.
• Examiner au microscope

La majorité des hématies sont maintenant visibles comme de petites sphères, ce qui éclairci la lame et permet de voir des éléments qui autrement sont masqués.

Méthode à l'acide acétique.

Bien que ce ne soit pas une coloration comme telle, l’ajout d’acide acétique augmente grandement le contraste et la visibilité des noyaux , spécialement ceux des polynucléaires et hémolyse les hématies.

Technique:

• Prendre 3 gouttes de culot et ajouter une goutte d’acide acétique 2%
• Examiner au microscope